1.1 实验仪器和材料
实验仪器包括高压灭菌器,电子天平,pH计,温度计,无菌操作台,生化培养箱,恒温振动仪,离心机,移液枪,电子显微镜,培养皿若干,锥形瓶若干,封口纸,酒精灯,接种环等。航空煤油样品取自天津滨海国际机场航空煤油废弃罐底部,航空煤油呈棕黄色浑浊状态。由于航空煤油中主要含有细菌和真菌,因此,本实验主要研究真菌和细菌的分离和鉴定。本实验分离微生物时采用的是固体培养基,其中1L真菌培养基的组成如下:硝酸钠3.0090g,硫酸亚铁0.0120g,磷酸氢二钾1.0242g,蔗糖30.1209g,硫酸镁0.5628g,琼脂粉20.0892g,向培养基中加入少量稀硝酸,使pH值调至6.8左右。1L细菌固体培养基组成如下:牛肉膏5.6561g,蛋白胨10.0243g,氯化钠5.0990g,琼脂粉21.2350g,加入少量氢氧化钠溶液,使pH值调至7.2左右。本实验富集微生物时采用液体培养基,只需把琼脂粉剂量减半即可。
1.2.实验方法
1.2.1 航空煤油中微生物的富集、分离和鉴定
1)微生物富集
在高压蒸汽灭菌器内调节表压大约为0.1MPa,温度为121 ,将培养基灭菌20min左右,并且在无菌操作下倒入培养皿内,待温度适宜后开始微生物的富集培养。富集真菌时,加入80%(体积分数)的乳酸溶液数滴,以抑制细菌生长。
2)分离
将富集后的真菌采用倍数稀释法进行分离,富集时在液体培养基中进行,分离时采用固体培养基,便于微生物菌落的观察和挑取[7]。
3)生长实验
将富集分离后得到的纯种微生物菌株用接种环在无菌条件下接种到灭菌后的无机盐固体培养基上,加入灭菌标准航空煤油作为唯一碳源,在生化培养箱内于恒温32 进行培养,观察菌株能否在唯一碳源培养基上生长。若生长,则表明该菌株为能在航空煤油中生长的菌株;反之,则表明该菌株可能是在操作过程中的污染菌株。将能在唯一碳源培养基上生长的菌株保存,以备鉴定。1.2.2