化妆品防腐效能试验检测——CFFA方法

2017-01-18 10:32:21 天纬化学 449

列出了用于化妆品防腐效能试验中的常用微生物，其中包括了与眼部有联系的细菌，这些细菌是从眼部区域天然存在的微生物区系，或从临床上分离出来的，或从污染的产品中分离获得的。防腐效能试验中常用的细菌培养基包括NA、TSA(水解大豆琼脂培养基）、EA(琼脂培养基）。适宜于真菌生长的培养基包括SDA(糊精琼脂培养基）、PDA(马铃薯琼脂培养基）或MA(琼脂培养基）。当菌体生长好后，可将细菌或酵母菌于5℃下斜面保存，霉菌可在室温下斜面保存。每隔一定时间（一周或一个月）进行传代来保持菌种的生存，但频繁传代会使菌种的某些特性丢失或减弱微生物的抗性，冷藏或冷冻干燥保存微生物是一种取代斜面保存的方法，因为它克服了频繁传代的缺点，保证了遗传性状的稳定性。还应注意的是在没有选择压力的情况下由于频繁传代抗性更易丧失。在含有防腐剂的化妆品中分离出来的微生物，可能仍然保留着对防腐剂的抵抗力。

在准备接种物时，可以用肉汤或琼脂培养基培养细菌和酵母菌，收获的菌体用于微生物检验。在进行微生物检验时，一般取20g或20ml样品，微生物的接种浓度控制在1×10cfu细菌ml（或g）产品，或1×10cfu酵母菌ml（或g）产品。为了获得每种或每一类群微生物的试验数据，CTFA倾向于使用纯培养物或相当类似的微生物来接种，体积不应超过总体积的1%，这些检验水平提供了比通常消费者使用可能性更高的细菌污染机会。加之，在产品设计时许多产品还有保护性体系，即加入略多一些的防腐剂，因此，大多数经检验后确定的防腐剂浓度保证了产品可以在消费者使用期间抵抗污染，而且比它们的一般要求严格得多。样品一旦接种，实验人员就会将其与被测产品彻底混合，同时，取出样品在适宜的中和性肉汤中稀释，从而使防腐剂失去效力。大多数方法采用1g或1ml混合物倾注平板培养。有些实验室使用选择

性平板涂布方法来估计微生物的数量。那些对温度敏感的微生物则可采用涂布的方法、一般来讲细菌的培养温度为32℃--35℃真菌采用25℃--30℃培养。多数试验方法（CTFA,USP,ASTM等）推荐混合测试的样品分别于0、1、2、3天（仅用于眼部的化妆品）、7、14和28天观察微生物的生长情况。有些检验可能多于28天，这依赖于其所期望的使用范围。有些产品还进行重复性的防腐试验来估计防腐剂在产品中的适应性，用某一特定的微生物防腐试验可以得出使防腐系统失去效力所需的检验次数。CTFA所推荐的含有中和剂的稀释培养基有：LBL,LBLT,TGB或WB.当使用倾注平板法培养时，加入培养基中的卵磷脂或吐温—80就可以中和绝大多数的防腐剂，并使产品均匀分布，对细菌、酵母和真菌来讲，letheen.琼脂培养基是最常使用的培养基，这种培养基还适用于厌氧菌的生长，对于中和季铵盐类化合物十分有效。其他的CTFA推荐的培养基有：TSA（大豆酪蛋白水解物培养基），NA（营养琼脂），TA(硫代乙醇酸琼酯），混合琼脂（脑、心、小牛肉的混合物），EA，TGYEA(胰胨B葡萄糖B酵母提取物琼脂），TCG-YEA(胰蛋白酶水解物B葡萄糖B酵母提取物琼脂，D-E培养基，以及TSAPL(含卵磷脂和吐温80的胰蛋白酶大豆水解琼脂）；其他还有使真菌富集的培养基，如右旋葡萄糖琼脂，Mycophil琼脂，Mycological琼脂和Eugon-gar。当划线培养时，中和剂和琼脂培养基相混，多数使用的是lb琼脂培养基，如果防腐剂是汞或其他重金属，则应采用硫代乙醇酸的培养基。

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